(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北恩施445000)

摘要:目的觀察肉蓯蓉總苷( GCS )對SD大鼠腦缺血及再灌注損傷與腦組織興奮性氨基酸(EAA)的影響。方法將SD大鼠經(jīng)肉蓯蓉總苷處理后，建立大鼠腦缺血再灌注模型，觀察肉蓯蓉總苷對腦組織中天冬氨酸(Glu )、谷氨酸(Asp，r-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)含量的影響。結(jié)果肉蓯蓉總苷能夠降低SD大鼠腦缺血再灌注后腦織Glu的含量。結(jié)論肉蓯蓉總苷抗缺血性腦損傷的作用機制可能與其對抗腦缺血及再灌注后 EAA的升高有關(guān)。

關(guān)鍵詞:肉蓯蓉總苷;興奮性氨基酸;腦缺血;再灌注

近年來，興奮性氨基酸(EAA)和老年癡呆發(fā)病以及學(xué)習(xí)記憶的密切關(guān)系已引起重視。許多證據(jù)表明EAA的神經(jīng)毒J勝作用，尤其是異常升高的谷氨酸(Glu )在阿爾茨海默病(Alzheimer , disease , AD)的發(fā)生，發(fā)展過程中起著極為重要的作用，蓯而為老年癡呆防治藥物的研究開辟了新的途徑[1~3]。肉蓯蓉總苷( GCS )對小鼠腦缺氧有保護作用，對小鼠學(xué)習(xí)記憶有促進作用，對小鼠腦缺血再灌注損傷有保護作用，能有效地清除各種活性氧自由基和保護經(jīng)基(OH)引發(fā)的DNA氧化損傷等[4]。本課題采用高效液相色譜技術(shù)對肉蓯蓉總苷

對大鼠腦缺血再灌注后腦組織興奮性氨基酸含量進行測定，蓯而探討肉蓯蓉總苷改善腦功能的作用機制。

1材料與方法

1.1試驗藥物蓯蓉總苷，杏輝天力(杭州)藥業(yè)有限公司，批號:20081516，用時生理鹽水配制。

1.2動物SD鼠60只，體重(20. 0士1.9)g，雌雄各半，由湖北省實驗動物中心提供。

1.3試劑與儀器谷氨酸(Glu )、天冬氨酸(Asp ) ,氨基丁酸(GABA),，一甘氨酸(Gly)標(biāo)準(zhǔn)品均為美國Sigma公司產(chǎn)品，純度99.9 %(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，其它試劑均為國產(chǎn)分析純;TG328A型電子分析天平、R E-S2型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、儀器包括GL-20A型高速冷凍離心機(湘儀總廠離心機廠)、LC-6A高效液相色譜儀和RF-530熒光檢測儀(日本島津)。

1.4動物模型的建立SD大鼠隨機分為假手術(shù)對照組(A組)、缺血模型對照組(B組)、缺血加肉蓯蓉總苷藥液組(C組)、缺血再灌注模型組(D組)、再灌注加肉蓯蓉總苷原方組(E組)。缺血加原方組和再灌注加原方組均腹腔注射(ip)肉蓯蓉總苷藥4. 0 g·kg-1’;假手術(shù)組、缺血模型組和再灌注模型組均ip等容量生理鹽水，連續(xù)給藥2d。大鼠連續(xù)灌胃2d后，第3天以線栓法制作大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型(缺血15 min，再灌注48 min)。10%水合氯醛(350 g/100 g)腹腔注射麻醉大鼠后，分離右頸總動脈并剪一小口，將直徑0. 215mm國產(chǎn)尼龍線頭端燒成光滑柞狀(直徑0. 26~0. 3 mm)插人，以頸總動脈分叉處計算進線深度為(18. 0土0.5)mm，至大腦中動脈起始部以完全阻斷血供。再灌注時外托尼龍線，即可恢復(fù)頸內(nèi)動脈及大腦中動脈的血液供應(yīng)。模型成功的標(biāo)志是大鼠出現(xiàn)右眼Homer征;提尾時左前肢內(nèi)收屈

曲;爬行時向左側(cè)傾倒或按逆時針方向轉(zhuǎn)圈。假手術(shù)組除不插人線栓外，其他操作步驟同上[5~9];

1.5觀察指標(biāo)及方法大鼠經(jīng)再灌注48 min后，斷頭切取大腦皮層在冰浴下，按照40 g·L-1’比例，用濃度為0. 02 mol·L一’的鹽酸，制作腦組織勻漿，置于10 000 r·min-1’離心15min，取上清液，采用高效液相色譜法進行分析。

1. 6   HPLC分析條件LC-6A高效液相色譜儀，Nova-pakCia(150 mm x4 mm,5 N,m)，流動相:50 mmol·L-1’醋酸鈉:甲醇:THF(A,82:17:1)，流動相:50 mmol·L-1’醋酸鈉:甲醇:THF ( B , 22: 77 : l)，流速:1 ml·min-1’，柱溫:27℃，檢測波長:425 nm，進樣量:100µl，梯度條件見表1 [5]。

1.7統(tǒng)計分析各組數(shù)值用(x士:)表示，采用SPSS13. 0軟件對數(shù)據(jù)進行ANNOVA單因素方差分析，P<0.05和P<0. 01認(rèn)為有顯著性和高度顯著性的統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組腦組織Glu含量比較表1顯示，缺血15 min后，B組腦組織Glu含量高于A組(P<0.05);C組織Glu含量低于B組(P<0.05)，與A組間差異無顯著性(P>0.05)。再灌注48 min后，D組腦組織Glu含量高于A組(P<0.05)，與B組比較差異無顯著性(P>0.05);E組腦組織Glu含量低于D組(P<0.05)，與A組比較差異無顯著性(P>0.05)

2. 2其他氨基酸在各組腦組織的含量比較表I顯T,I徐B組及D組腦組織Asp}GABA含量高于A組(P<0.05或P<0. 01)外，其他各組比較均無顯著性(P>0.05);各組腦組織Gly含量比較，差異均無顯著性(P>0.05)

3討論

興奮性氨基酸是重要的神經(jīng)遞質(zhì)，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)。已有文獻報道表明，腦缺血再灌注時，能夠引發(fā)興奮性氨基酸在腦組織中的含量明顯增高。這是由于腦缺血再灌注時，腦組織中的神經(jīng)元去極化，神經(jīng)細(xì)胞攝取興奮性氨基酸的能力嚴(yán)重受損，蓯而使得細(xì)胞外興奮性氨基酸的含量明顯增高[11~13]

本研究結(jié)果顯示，肉蓯蓉總著能夠顯著降低大腦皮層興奮性氨基酸的含量。由此可得出如下結(jié)論:肉蓯蓉總苷對于急性局灶性腦缺血再灌注大鼠所引發(fā)的病理過程具有確切的干預(yù)作用，其作用機制之一是通過調(diào)節(jié)大腦皮層興奮性氨基酸含量來實現(xiàn)的。